本期小助手帮大家详解一个细胞实验◈✿★，从鼠的脂肪细胞中分离巨噬细胞的实验◈✿★，步骤多◈✿★、操作繁琐◈✿★，但别急◈✿★，跟着小助手一步一步来做千赢·国际(游戏) 手机官网◈✿★，话不多说◈✿★，上干货◈✿★。

　　•将切碎的组织转移到含有7mL冰冷消化缓冲液的10mL圆底管中千赢·国际(游戏) 手机官网◈✿★，此操作需一直保持在冰上◈✿★。对于1g的脂肪◈✿★，将组织切碎并转移到含有10mL冰冷消化缓冲液的50mL锥形管中◈✿★。

　　•加入1mL（如脂肪组织重量1g则可以增加至1.5mL）10×胶原酶缓冲液◈✿★，并加入消化缓冲液使得胶原酶的最终浓度为1mg/mL◈✿★。

　　•在37°C下孵育半小时◈✿★，且使试管剧烈摇晃饭岛爱◈✿★。每10分钟大力摇动试管◈✿★，可获得更高的细胞产量◈✿★。30分钟后◈✿★，取10µL产物进行显微镜观察饭岛爱千赢·国际(游戏) 手机官网◈✿★，此时饭岛爱◈✿★，脂肪细胞应显示为大的单细胞◈✿★，白细胞和其他基质细胞会小得多◈✿★。如果白细胞仍附着在脂肪细胞上◈✿★，则应继续消化◈✿★；如果没有◈✿★，请继续下一步◈✿★。

　　•用 PBS预湿100µm尼龙过滤器◈✿★，然后放置在50mL锥形管上◈✿★。使用移液管◈✿★，将前述样本的细胞沉淀先转移到过滤器上过滤◈✿★，然后再过滤含有脂肪细胞的上层◈✿★。

　　•在4°C下以500×g 离心10分钟以分离脂肪细胞和巨噬细胞◈✿★。离心后饭岛爱◈✿★，脂肪细胞在顶部形成白色层千赢·国际(游戏) 手机官网◈✿★，而巨噬细胞等其它细胞在管底部形成红色或白色沉淀◈✿★。

　　•将10µL每个样品1:1与台盼蓝溶液混合◈✿★。使用血细胞计数板仔细计数活细胞千赢·国际(游戏) 手机官网◈✿★。根据计数得到的细胞数量◈✿★，结合获得的样本总体积千赢·国际(游戏) 手机官网◈✿★，可计算出每份脂肪组织巨噬细胞产量◈✿★。典型的产量◈✿★：瘦小鼠一般为1-3×1000000个细胞/g脂肪◈✿★，肥胖小鼠一般为2-5×1000000个细胞/g脂肪饭岛爱◈✿★。

　　1◈✿★、尽可能切碎组织◈✿★，在消化过程中频繁手动摇动增加接触面积◈✿★。2饭岛爱◈✿★、胶原酶消化脂肪组织时千赢·国际(游戏) 手机官网◈✿★，碎组织大小饭岛爱◈✿★、摇动强度和孵育时间是关键参数◈✿★，应对其进行优化千赢·国际(游戏) 手机官网◈✿★，以最大限度地提高从脂肪提取巨噬细胞的产量◈✿★。3◈✿★、胶原酶的消化时间应根据每批胶原酶分别进行优化◈✿★。增加胶原酶缓冲液中的孵育时间◈✿★，尤其是超过1小时◈✿★，会显著降低细胞产量并增加细胞死亡几率◈✿★。千赢·体育(国际)官方网站◈✿★。千赢体育国际官方网站◈✿★，水资源◈✿★，千赢国际官网登陆◈✿★，